完整N-糖蛋白分析

可同时鉴定糖基化修饰和可能共存的其他修饰，鉴定不同修饰之间的相互作用。

样本形式

经各种方法富集到的单个完整N-糖蛋白

样本要求

● 样本量：动物组织>1 g；植物组织>200 mg；血液样本>1 mL（注意用EDTA防凝）；血清>0.5 mL；尿液>2 mL；细胞>5×10^7；酵母/微生物>200 mg

● 尽量避免使用表面活性剂（SDS、Triton-X）和无机盐

样本运输

独立密封干冰盒运输

实验流程选项

● 基本流程：nanoESI-MS/MS → 基于蛋白质骨架和N-连接糖部分选择性解离的数据库搜索与鉴定

● 选项：1）互补的N-连接糖分析；2）互补的含N-糖基化位点多肽分析；3）互补的完整N-糖肽分析

测试报告

● 实验步骤（中英文）

● 质谱仪采集的原始数据

● 完整N-糖蛋白数据库搜索引擎定性搜索结果

1）氨基酸序列、N-糖基化位点、单糖组成/序列/连接

2）基于蛋白质骨架氨基酸链解离（N-连接糖部分保持完整，作为静态修饰处理）和完整N-糖蛋白数据库搜索的图形解离匹配。

3）基于N-连接糖部分解离（氨基酸链保持完整，作为静态修饰处理）和N-连接糖数据库搜索的图形解离匹配。

参考文献

1. Top-down tandem mass spectrometry on RNase A and B using a Qh/FT-ICR hybrid mass spectrometer. Proteomics, 2014, 1174-1184.

2. Selective fragmentation of the N-glycan moiety and protein backbone of ribonuclease B on an Orbitrap Fusion Lumos Tribrid Mass Spectrometer. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2018, 32, 2031-2039

3. Top-down protein identification using isotopic envelope fingerprinting. Journal of Proteomics, 2017, 152, 41-47.

4. Online hydrophilic interaction chromatography (HILIC) enhanced top-down mass spectrometry characterization of the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain. 2022, 94, 5909-5917.

5. Structural O-glycoform heterogeneity of the SARS-CoV-2 spike protein receptor-binding domain revealed by top-down mass spectrometry. Journal of the American chemical society, 2021, 143, 12014-12024.

6. Proteoform profiles reveal that alpha-1-antitrypsin in human serum and milk is derived from a common source. Frontiers in Molecular Biosciences, 2022, 9, 858856.