磷酸化多肽分析

样本形式

新鲜冷冻组织，FFPE组织，体液（血浆血清、尿液），细胞，完整蛋白，多肽

样本要求

● 样本量：动物组织>1 g；植物组织>200 mg；血液样本>1 mL（注意用EDTA防凝）；血清>0.5 mL；尿液>2 mL；细胞>5×10^7；酵母/微生物>200 mg

● 尽量避免使用表面活性剂（SDS、Triton-X）和无机盐

样本运输

独立密封干冰盒运输

实验流程选项

● 基本流程：蛋白酶酶切 → 磷酸化多肽富集 → RPLC-nanoESI-MS/MS → 数据库搜索与鉴定 → 基于位点决定性碎片离子定位

● 选项：1）high-pH RPLC离线预分离及馏分组合；2）客户化蛋白酶；3）客户化富集材料；4）同位素或等重标记定量

测试报告

● 实验步骤（中英文）

● 质谱仪采集的原始数据

● 磷酸化多肽数据库搜索定性定量结果

1）基于靶向-诱饵库搜索和谱图水平FDR控制的磷酸化多肽IDs的全面鉴定信息，包括氨基酸序列和磷酸化位点（得到包括磷酸化基团的位点决定性碎片离子的定位确认）。

2）基于同位素或等重标记的相对定量信息，如癌跟癌旁的比值。

参考文献

1. A current view on Tau protein phosphorylation in Alzheimer's disease. Curr Opin Neurobiol 69, 131-138 (2021).

2. The global phosphorylation landscape of SARS-CoV-2 infection. Cell 182, 685 (2020).

3. Fine-tuning of RBOHF activity is achieved by differential phosphorylation and Ca2+ binding. Nature, 567, 394 (2019)

4. Accurate phosphorylation site localization using phospho-brackets. Analytica Chimica Acta, 996, 38-47 (2017)

5. A large synthetic peptide and phosphopeptide reference library for mass spectrometry-based proteomics. Nature Biotechnology, 31, 557 (2013).