含N-糖基化位点多肽分析

样本形式

新鲜冷冻组织，FFPE组织，体液（血浆血清、尿液），细胞，完整蛋白，多肽

样本要求

● 样本量：动物组织>1 g；植物组织>200 mg；血液样本>1 mL（注意用EDTA防凝）；血清>0.5 mL；尿液>2 mL；细胞>5×10^7；酵母/微生物>200 mg

● 尽量避免使用表面活性剂（SDS、Triton-X）和无机盐

样本运输

独立密封干冰盒运输

实验流程选项

● 基本流程：蛋白酶酶切 → 完整N-糖肽富集 → 糖苷酶酶切 → RPLC-nanoESI-MS/MS → 数据库搜索与鉴定

● 选项：1）high-pH RPLC离线预分离及馏分组合；2）客户化蛋白酶；3）客户化N-连接糖酶切；4）同位素或等重标记定量

测试报告

● 实验步骤（中英文）

● 质谱仪采集的原始数据

● 含N-糖基化位点多肽数据库搜索定性定量结果

1）基于靶向-诱饵库搜索和谱图水平FDR控制的全面鉴定信息，包括氨基酸序列和N-糖基化位点。

2）基于同位素或等重标记的相对定量信息，如癌跟癌旁的比值。

参考文献

1. Plasma membrane N-glycoproteome analysis of wheat seedling leaves under drought stress. International Journal of Biological Macromolecules, 2021, 193, 541-1550.

2. Systems-wide analysis of glycoprotein conformational changes by limited deglycosylation assay. Journal of Proteomics, 2021, 248, 104355.

3. Site-specific N-glycosylation analysis of animal cell culture-derived Zika virus proteins. Scientific Reports, 2021, 11, 5147.

4. Glyco-CPLL: An integrated method for in-depth and comprehensive N-glycoproteome profiling of human plasma. Journal of Proteome Research, 2020, 19, 655-666.

5. An integrated strategy for high-sensitive and multi-level glycoproteome analysis from low micrograms of protein samples. Journal of Chromatography A, 2019, 1600, 46-54.