完整 O-糖肽分析

O-糖基化发生在 Ser（丝氨酸）和 Thr（苏氨酸）上，与肿瘤增殖、侵袭、转移等密切相关。根据与丝氨酸或苏氨酸相连的单糖残基，O-糖基化可分为粘蛋白和非粘蛋白类型。 在粘蛋白类型中，连接的单糖残基是 N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)，而在非粘蛋白类型中，连接的残基可以是 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc)、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、木糖或半乳糖。 与 仅有一个核心结构的N-连接糖基化相比，单糖附着的异质性使得哺乳动物的 O-糖基化机制高度多样化和复杂，具有8个核心结构及4个额外的拓展核心结构。基于液-质联用的O-糖蛋白质组学是位点特异定性定量分析复杂体系O-糖基化的首选方法。

样本形式

新鲜冷冻组织，FFPE组织，体液（血浆血清、尿液），细胞，完整蛋白，多肽

样本要求

● 样本量：动物组织>1 g；植物组织>200 mg；血液样本>1 mL（注意用EDTA防凝）；血清>0.5 mL；尿液>2 mL；细胞>5×10^7；酵母/微生物>200 mg

● 尽量避免使用表面活性剂（SDS、Triton-X）和无机盐

样本运输

独立密封干冰盒运输

实验流程选项

● 基本流程：蛋白质组制备 → N-连接糖基化的去除 → 多肽组的制备 → 完整 O-糖肽富集 → RPLC-nanoESI-MS/MS → 基于组成和结构指纹的位点和结构特异性数据库搜索与鉴定

测试报告

● 实验步骤（中英文）

● 质谱仪采集的原始数据

● O-糖肽数据库搜索结果

1）列表输出：特征多肽及对应蛋白质定性，差异表达多肽及对应蛋白质定量

2）可视化视图呈现：特性分布图、PCA 分布图，热图，GO（亚细胞定位、分子功能、生物过程），KEGG通路信号，PPI互作蛋白网络，潜在标志物组合及 ROC，聚类分子分型及生存曲线分析。

参考文献

1. Exploration of quantitative site-specific serum O-glycoproteomics with isobaric labelling for the discovery of putative O-glycoprotein biomarkers. Proteomics-Clinical Applications, 2022, prca.202100095.

2. Exploring regulation of protein o-glycosylation in isogenic human hek293 cells by differential o-glycoproteomics. Molecular & Cellular Proteomics, 2019, 18, 1396-1409.

3. Targeted O-glycoproteomics explored increased sialylation and identified MUC16 as a poor prognosis biomarker in advanced-stage bladder tumours. Molecular Oncology, 2017, 11, 895-912.

4. A strategy for O-glycoproteomics of enveloped viruses the O-glycoproteome of herpes simplex virus type 1. Plos Pathogens, 2015, 11, e1004784.

5. Advances in mass spectrometry driven O-glycoproteomics. Biochimica et Biophysica Acta-General Subjects, 2015, 1850, 33-42.